填料對(duì)色譜柱影響和導(dǎo)致壽命縮短原因

　　柱填料的物理性能對(duì)填料色譜行為有重要影響，填料主要的物理性能包括如下：顆粒度，孔徑，孔體積，鍵合相化學(xué)，含碳量及烷基化處理。

　?。?）顆粒度是指柱填料的顆粒直徑的大小，實(shí)際上色譜柱上所標(biāo)的粒徑是一個(gè)平均值，如粒徑“5μm”并不是柱中填料所有的顆粒直徑都是5μm，實(shí)際上有一個(gè)顆粒分布度，這種分布度對(duì)柱反壓及柱效有重要作用，一般來(lái)說(shuō)，平均顆粒度越小，顆粒分布度越小，色譜柱效越高，反壓亦越高，目前C18柱色譜柱填料粒徑在4～10μm之間。

　?。?）孔徑是指填料顆粒間的孔間隙，一般所說(shuō)的孔徑是指填料的平均孔徑，球形填料裝柱后平均孔徑分布比較窄，柱床結(jié)構(gòu)均勻，柱效高，重現(xiàn)性好，無(wú)定形填料平均孔徑分布較寬，柱床結(jié)構(gòu)不均勻，流動(dòng)相線性速度不均勻，譜帶擴(kuò)寬，平均孔徑的大小對(duì)分離大分子化合物有較大的影響，在分離含有較大分子的樣品時(shí)可能會(huì)有分子排阻效應(yīng)，或產(chǎn)生吸附效應(yīng)從而影響定量的回收率及準(zhǔn)確度，色譜柱因而在用反相色譜分離諸如蛋白或多肽樣品時(shí)應(yīng)考慮選用大孔徑(如30nm)的反相柱填料，孔體積作為硅膠多孔性的參數(shù)，在分離分析較大分子化合物時(shí)可作參考，選用較大孔體積的反相柱填料。

　?。?）化學(xué)鍵合相填料在高效液相色譜法中占有極重要的地位，它可以鍵合極性較大的有機(jī)基團(tuán)，采用極性較小的溶劑作流動(dòng)相，亦可鍵合極性較小的有機(jī)基團(tuán)，選用極性較大的溶劑作流動(dòng)相。

　　一種可能是由于流動(dòng)相pH值超出建議范圍而導(dǎo)致色譜柱塌陷，這也可能是由于色譜柱樣品溶解在強(qiáng)酸或堿性溶液中引起的。

　　此外，還有一些色譜柱用于特定的項(xiàng)目，例如氨基柱與醛和酮會(huì)發(fā)生反應(yīng)，在無(wú)緩沖的水溶液中的氨基柱會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)堿性，導(dǎo)致部分硅膠溶解。

　　如果使用了錯(cuò)誤的溶劑，色譜柱也會(huì)塌陷，原因是色譜柱從根本上說(shuō)是非常松散的結(jié)構(gòu)，它們通過(guò)顆粒彼此的粘附而部分地保持在一起，當(dāng)將其置于能夠破壞這種粘附力的流動(dòng)相中時(shí)，塌陷的可能性就會(huì)增加，這偶爾會(huì)發(fā)生在中等極性溶劑中的氰基柱或THF中的苯基柱。

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