緩沖液指由一種共軛的質(zhì)子給體和質(zhì)子受體構(gòu)成的可離子化合物的溶液，在液相色譜使用時(shí)，加入少量酸或堿時(shí)維持溶液pH穩(wěn)定的作用。
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1.緩沖分析物，使其保持在所需的pH值處。由于在實(shí)際分析工作中，色譜柱上的樣品質(zhì)量非常少，因此僅需要很少的緩沖液就能為樣品提供足夠的緩沖。如果樣品與流動(dòng)相的pH值相差大，且進(jìn)樣量太大，建議在進(jìn)樣前先調(diào)節(jié)樣品溶液至接近流動(dòng)相pH值。
2.緩沖色譜柱，使其保持恒定的pH值。由于大量的緩沖流動(dòng)相通過色譜柱，所以固定相不斷暴露在緩沖液中。隨著現(xiàn)在商品化的硅膠基質(zhì)色譜柱純度的提高，硅膠上的酸性硅醇基團(tuán)的含量也越來越低，因此所需的緩沖液也越來越少。
緩沖鹽的濃度緩沖鹽的濃度對離子樣品保留值的影響通常較小，濃度一般為10-50mmol/L（但是最好根據(jù)具體情況確定）。
主要取決于所需要的緩沖能力，在反向色譜中，流動(dòng)相中水相的pH和離子強(qiáng)度在開發(fā)對條件微小變化不敏感的耐用方法中非常重要。對于離子型化合物，典型的樣品的保留隨pH改變而明顯變化。通常在pH2-4的條件下，保留時(shí)間對pH的微小改變穩(wěn)定性最高。因此建議將這范圍作為大多數(shù)樣品方法開發(fā)的起始pH，包括堿性化合物和一般的弱酸。緩沖鹽溶液的pH值越接近其pka，緩沖能力越強(qiáng)。一般緩沖鹽溶液的pH值應(yīng)在其pka±1的范圍內(nèi)。
如酸性條件下分離堿性化合物，加入NH?CL，堿性物質(zhì)離子與反離子相互作用的平衡導(dǎo)致它們相互的溶劑化并形成相關(guān)復(fù)合物離子：[堿]+[Cl]? = [堿+Cl? ]；在低pH時(shí)，堿性化合物被完成質(zhì)子化，溶液陰離子（如CL? ）在流動(dòng)相中破壞了堿性物周圍的水分子并增加其疏水性，導(dǎo)致樣品保留時(shí)間增加，當(dāng)鹽濃度大于50mM時(shí)，保留時(shí)間略有下降，這可能是飽和反離子CI-引起的離子相互作用的屏蔽作用。此外還可以添加硫酸鈉或者高氯酸鈉等改變堿性化合物的保留。
1.緩沖液最好要現(xiàn)配現(xiàn)用，往往緩沖液是良好的菌類培養(yǎng)液。2.由于緩沖鹽可能與設(shè)備、樣品和或色譜柱發(fā)生作用因此要特別注意，例如磷酸鹽，在含有高濃度有機(jī)相（70%以上），可能會(huì)析出；一些緩沖劑放置即降解，貯存或長期使用后其紫外吸收會(huì)增加（如：TFA、三乙胺）；一些緩沖鹽能通過形成離子對，對樣品發(fā)生作用（如三氟醋酸緩沖劑與陽離子樣品，三乙胺與陰離子樣品等）。
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