高效液相色譜儀(HPLC)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。檢測(cè)器是HPLC的關(guān)鍵組成部分之一，它將色譜柱連續(xù)流出的樣品組分轉(zhuǎn)變成易于測(cè)量的電信號(hào)，被數(shù)據(jù)系統(tǒng)接收，得到樣品分離的色譜圖。常用檢測(cè)器有紫外吸收、熒光、示差折光、化學(xué)發(fā)光等。接下來讓我們?cè)敿?xì)介紹一下在液相色譜中六種檢測(cè)器的原理及特點(diǎn)。
紫外檢測(cè)器是一種應(yīng)用最廣HPLC檢測(cè)器，當(dāng)檢測(cè)波長(zhǎng)范圍包括可見光時(shí)，又稱為紫外-可見檢測(cè)器。紫外檢測(cè)器的工作原理是朗伯-比爾（Lambert-Beer）定律。其特點(diǎn)是靈敏度高（檢測(cè)下限為10-10g/ml），線性范圍寬，噪聲低，它的最重要特征是對(duì)流動(dòng)相的流速和溫度變化不敏感，適用于梯度洗脫，對(duì)強(qiáng)吸收物質(zhì)檢測(cè)限可達(dá)1ng，檢測(cè)后不破壞樣品，可用于制備，并能與任何檢測(cè)器串聯(lián)使用。紫外可見檢測(cè)器的工作原理與結(jié)構(gòu)同一般分光光度計(jì)相似，實(shí)際上就是裝有流動(dòng)相的紫外可見光度計(jì)。 因此即使是那些光吸收小、消光系數(shù)低的物質(zhì)也可用UV檢測(cè)器進(jìn)行微量分析。但它只能檢測(cè)有紫外吸收的物質(zhì)，而且流動(dòng)相有一定限制，即流動(dòng)相的截止波長(zhǎng)應(yīng)小于檢測(cè)波長(zhǎng)。如果溶劑中含有吸光雜質(zhì)，則會(huì)提高背景噪音，降低靈敏度。此外，梯度洗脫時(shí)或測(cè)定波長(zhǎng)較短時(shí)，基線還會(huì)產(chǎn)生漂移。光電二極管陣列檢測(cè)器(PAD)原理與UVD相同，區(qū)別在于PAD可檢測(cè)到所有波長(zhǎng)的吸收值，是全掃描光譜圖。PAD的優(yōu)點(diǎn)是可以獲得樣品組分的全部光譜信息。
即，在一次色譜操作中，可同時(shí)獲得吸光值、流出時(shí)間和各組分的紫外-可見光譜圖在一起的三維譜圖，提供既定量又定性的色譜信號(hào)。吸收光譜用于組分的定性，色譜峰面積用于定量。使用二極管陣列檢測(cè)器，可以對(duì)色譜峰進(jìn)行光譜掃描，峰純度鑒定的定性分析，在方法研究中可以快速選擇最佳檢測(cè)波長(zhǎng)，在多組分混合物分析中可以編輯波長(zhǎng)程序。采用二極管陣列檢測(cè)器進(jìn)行論證，也是目前常采用的一個(gè)強(qiáng)有力的手段。它通過對(duì)一個(gè)色譜峰的數(shù)點(diǎn)進(jìn)行紫外掃描，然后比較所得到的掃面圖譜的接近程度從而評(píng)價(jià)被檢測(cè)峰的純度。但是，利用二極管陣列檢測(cè)器進(jìn)行峰純度檢查存在兩個(gè)缺點(diǎn)：1、雜質(zhì)濃度低，或與主成分相比吸收太小，達(dá)不到檢測(cè)靈敏度，無法檢測(cè)出來。2、當(dāng)雜質(zhì)的發(fā)色團(tuán)與主成分一致，或者說雜質(zhì)與主組分有相同或幾乎相同的光譜圖且具相近的流出時(shí)間，此時(shí)雜質(zhì)也無法發(fā)現(xiàn)。熒光檢測(cè)器是一種高靈敏的選擇性檢測(cè)器，其靈敏度比紫外檢測(cè)器高10-1000倍。它適用于檢測(cè)能產(chǎn)生熒光的化合物。某些不發(fā)熒光的物質(zhì)可通過化學(xué)衍生化生成熒光衍生物，再進(jìn)行熒光檢測(cè)。它的原理為有機(jī)共軛芳環(huán)分子受紫外光激發(fā)后發(fā)出熒光。
熒光檢測(cè)器其靈敏度很高，痕量分析和梯度洗脫樣品的檢測(cè)均可采用。其最小檢測(cè)濃度可達(dá)0.1ng／ml，適用于痕量分析；一般情況下熒光檢測(cè)器的靈敏度比紫外檢測(cè)器約高2個(gè)數(shù)量級(jí)，但其線性范圍不如紫外檢測(cè)器寬。
可用于熒光檢測(cè)的物質(zhì)有某些代謝物、食品、藥物、氨基酸、多肽、生物堿和甾族化合物等。由于熒光檢測(cè)器的高靈敏度和選擇性，它是體內(nèi)藥物分析常用的檢測(cè)器之一。 但其基線穩(wěn)定需要平衡的時(shí)間較長(zhǎng)。
示差折光檢測(cè)器的檢測(cè)基于被分析物的折光指數(shù)的差異，即測(cè)量樣品流路與參比流路在折光指數(shù)上的差別。當(dāng)折光指數(shù)差異最大時(shí)靈敏度也達(dá)到最大。它并不測(cè)量絕對(duì)的折光指數(shù)而是測(cè)定折光指數(shù)的差別。其典型的應(yīng)用領(lǐng)域?yàn)闆]有紫外吸收、熒光的化合物，例如：碳水化合物、聚合物脂肪酸及油脂類等。光從一種介質(zhì)進(jìn)入另一種介質(zhì)時(shí)，由于兩種物質(zhì)的折射率不同就會(huì)產(chǎn)生折射。只要樣品組分與流動(dòng)相的折光指數(shù)不同，就可被檢測(cè)，二者相差愈大，靈敏度愈高，在一定濃度范圍內(nèi)檢測(cè)器的輸出與溶質(zhì)濃度成正比。示差檢測(cè)器為通用檢測(cè)器，容易使用。通常來說是比較耐用的檢測(cè)器，維護(hù)成本低。但其靈敏度低、選擇性差，對(duì)流速、溫度及粘度的變化敏感，不能用于梯度洗脫。而且，色譜峰可能是正的，也可能是負(fù)的。電化學(xué)檢測(cè)器包括極譜、庫侖、安培和電導(dǎo)檢測(cè)器等。電導(dǎo)檢測(cè)器廣泛用于離子色譜儀中，應(yīng)用于能電離成離子物質(zhì)的檢測(cè)，其響應(yīng)受溫度影響較大。
安培檢測(cè)器應(yīng)用最廣泛，其靈敏度很高，尤其適合于痕量組分的分析，凡具氧化還原活性的物質(zhì)都能進(jìn)行檢測(cè)，如活體透析液中的生物胺，還有酚、羰基化合物、巰基化合物等。本身沒有氧化還原活性的化合物經(jīng)過衍生化后，也能進(jìn)行檢測(cè)。
電化學(xué)檢測(cè)器是根據(jù)電化學(xué)原理和物質(zhì)的電化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)。在液相色譜中，它可以檢測(cè)出所有電活性物質(zhì)。因此，對(duì)部分沒有紫外吸收或不能發(fā)出熒光但具有電活性的物質(zhì)，可采用電化學(xué)檢測(cè)法進(jìn)行檢測(cè)。若在分離柱后采用衍生技 術(shù)，還可將它擴(kuò)展到非電活性物質(zhì)的檢測(cè)。
化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器（Chemiluminescence detector， CD）是近年來發(fā)展起來的一種快速、靈敏的新型檢測(cè)器，因其設(shè)備簡(jiǎn)單、價(jià)廉、線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)。其原理是基于某些物質(zhì)在常溫下進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，生成處于激發(fā)態(tài)勢(shì)反應(yīng)中間體或反應(yīng)產(chǎn)物，當(dāng)它們從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時(shí)，就發(fā)射出光子。
由于物質(zhì)激發(fā)態(tài)的能量是來自化學(xué)反應(yīng)，故叫作化學(xué)發(fā)光。當(dāng)分離組分從色譜柱中洗脫出來后，立即與適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)發(fā)光試劑混合，引起化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致發(fā)光物質(zhì)產(chǎn)生輻射，其光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度成正比。
這種檢測(cè)器不需要光源，也不需要復(fù)雜的光學(xué)系統(tǒng)，只要有恒流泵，將化學(xué)發(fā)光試劑以一定的流速泵入混合器中，使之與柱流出物迅速而又均勻地混合產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，通過光電倍增管將光信號(hào)變成電信號(hào)，就可進(jìn)行檢測(cè)。這種檢測(cè)器的最小檢出量可達(dá)10-12g。
在化學(xué)史上有許許多多精美絕倫的實(shí)驗(yàn)，美國(guó)的“化學(xué)與工程新知”組織在2003年，邀請(qǐng)全球的眾多化學(xué)家和歷史學(xué)家共同投票選出十大最美麗實(shí)驗(yàn)，排名第一的是19世紀(jì)中葉巴斯德在顯微鏡下手工分離手性酒石酸鹽晶體。蒸發(fā)光檢測(cè)器(ELSD)是基于光線通過微小的粒子會(huì)產(chǎn)生光散射現(xiàn)象的原理。樣品經(jīng)色譜柱分離后會(huì)被氮?dú)鈬姙殪F狀液滴，云霧狀溶質(zhì)顆粒通過光路后產(chǎn)生光散射。ELSD要優(yōu)越于RID，靈敏度及檢出限高，對(duì)溫度敏感程度低，適用于梯度淋洗。
檢測(cè)器是高效液相色譜儀的重要組成部分，不同的檢測(cè)器的原理、使用的范圍和對(duì)象不同。所以針對(duì)不同的檢測(cè)器，我們應(yīng)該注意的重點(diǎn)也不同。只有這樣，才能更好地完成日常的分析檢測(cè)工作，提高工作效率。
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