HILIC色譜柱的分離機(jī)理及對(duì)保留的主要影響因素

HILIC色譜柱是用來(lái)改善反相色譜中保留強(qiáng)極性物質(zhì)較差的色譜技術(shù)。這種技術(shù)采用強(qiáng)極性的靜相材料，結(jié)合高比例的有機(jī)相和低比例的水相作為移動(dòng)相來(lái)實(shí)現(xiàn)。這種移動(dòng)相組成尤其有利于提高電噴霧離子化質(zhì)譜的敏感度。

HILIC柱的分離原理

目前對(duì)于分離機(jī)理仍存在一些爭(zhēng)議，主要涉及以下三個(gè)方面：

1. 分配機(jī)制

2. 離子交換

3.偶極-偶極相互作用。更多的實(shí)驗(yàn)觀察結(jié)果顯示，HILIC色譜柱的樣品保留機(jī)理涉及氫鍵作用、偶極作用和靜電作用等多種附加效應(yīng)，這些效應(yīng)難以明確區(qū)分。

HILIC柱對(duì)于保留物質(zhì)的影響有哪些主要因素？

一般認(rèn)為HILIC色譜柱的保留行為會(huì)受到多種因素的影響，包括固定相的功能團(tuán)、有機(jī)改性劑含量、流速、柱溫、流動(dòng)相的緩沖體系pH值、緩沖鹽種類和濃度。

固定相上保留行為的主要影響因素是流動(dòng)相中有機(jī)溶劑的比例，比如增加乙腈含量會(huì)明顯提高保留因子。在HILIC色譜柱分離模式中，溶劑洗脫能力由弱到強(qiáng)的順序是：丙酮<乙腈<異丙醇<乙醇<甲醇<水，水是較強(qiáng)的洗脫劑。通常使用乙腈-水流動(dòng)相，保持水的比例在5%-40%以發(fā)揮顯著的親水作用。若用甲醇、乙醇、異丙醇替代水相，流動(dòng)相極性降低，待測(cè)物在柱上的保留也會(huì)增加。