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液相色譜柱常見的填充方法有哪些?

欄目:行業(yè)資訊 發(fā)布時間:2021-04-20
目前大多數(shù)實驗室是購買商品預(yù)填裝柱來滿足分離、分析之需。液相色譜柱、特別是高效液相色譜柱的填裝,需要有較高的技巧和熟練的技能。因此,有人甚至將“裝柱”看作是“藝術(shù)加技術(shù)”。那你知道液相色譜柱常見的填充方法有哪些嗎?

  目前大多數(shù)實驗室是購買商品預(yù)填裝柱來滿足分離、分析之需。液相色譜柱、特別是高效液相色譜柱的填裝,需要有較高的技巧和熟練的技能。因此,有人甚至將“裝柱”看作是“藝術(shù)加技術(shù)”。那你知道液相色譜柱常見的填充方法有哪些嗎?

色譜柱

  高壓勻漿法裝填

  將填料懸浮在適宜的勻漿液中制成勻漿,在其尚未沉降之前,很快以高壓泵將其以很高的流速壓進柱中,便可制備出填充均勻的柱子。這是常見的分析和制備色譜柱的裝填方法。

  濕法裝填

  對于柱、特別是現(xiàn)在流行的以3-10μm細(xì)柱徑填料填裝的分析柱,則必須使用濕法,即勻漿法裝柱。因為,隨著粒徑的縮小,因靜電作用和表面能的加大,粒子間傾向于聚集和“粘結(jié)”,若以干法填裝,它們會粘附在連接管及柱壁上,也會因強烈的靜電作用彼此排斥,因而難以填裝出均勻而緊密的柱床。這樣,必須改以濕法裝填,即將填料懸浮于適宜的液體中消除上述不良作用。但是,在固-液系統(tǒng)中仍然存在因重力而引起的沉降現(xiàn)象。

  干法裝填

  對于粒徑較大的填料,可以用干法裝填,其基本方法與填裝氣相色譜柱類似。但需注意的一點是,在干法填裝制備液相色譜柱時,不要過分劇烈地振動和敲打。振動和敲打會使填料因自身粒徑的不均勻性而產(chǎn)生柱子整體上的不均一性,即較大的填料粒子靠近柱壁,而較細(xì)粒徑者則傾向集中于柱中心。這種柱內(nèi)顆粒分布的不均勻性,會導(dǎo)致柱效的降低。比較好的方法是采用小量多次的方法向柱內(nèi)加入填料,例如每次加入相當(dāng)于3-5mm柱床的填料,裝一點即在實驗臺或桌面上垂直地輕輕磕幾十下,續(xù)加一些填料后,重復(fù)上述操作,直至填裝完成。

  等密度法裝填

  在HPLC發(fā)展的早期,常采用“等密度法”來填裝柱。多孔硅膠的骨架密度較高。不同牌號的硅膠因制法不同而有差異,但多在2.2g/cm3以上。因此,需以高密度溶劑配制密度與硅膠骨架密度相近的混合液。常使用的高密度溶劑為碘代和溴代烷類,再與適當(dāng)比例的其他溶劑相配,配制出具有密度適宜的液體,使填料能呈“失重”狀態(tài)懸浮于勻漿液中,以從容地用高壓泵將其壓入空色譜柱中,制出填裝均勻的色譜柱。

  高粘度法裝填

  高粘度法,即使用黏度較高的勻漿液體系以阻止顆粒的沉降。可以采用乙二醇、聚乙二醇、甘油以及石蠟油等高黏度液體調(diào)配勻漿液。但是,高黏度導(dǎo)致流體阻力加大,必將延長裝柱時間且需使用更高的裝柱壓力,在實用上很不方便。因此,高黏度法已很少被采用。

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