使用質(zhì)譜引導(dǎo)怎樣實(shí)現(xiàn)手性化合物純化呢？

　　使用質(zhì)譜引導(dǎo)怎樣實(shí)現(xiàn)手性化合物純化呢？根據(jù)FDA的規(guī)定1，手性色譜已經(jīng)成為藥物開發(fā)早期為通過藥理學(xué)、毒理學(xué)和臨床信息準(zhǔn)確鑒定單一純對(duì)映體并進(jìn)行分離的首選工具。

　　超臨界流體色譜（SFC）因其具有更高的效率、更大的通量和更寬的適用性而被證實(shí)成為手性化合物分離的一種主流技術(shù)。手性SFC越來越受到關(guān)注并且其應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)大，在一些情況下逐漸成為首選方法。

　　通常情況下，對(duì)映體混合物含有一定數(shù)量的雜質(zhì)，對(duì)于常用的疊加進(jìn)樣和基于信號(hào)閾值的收集策略而言（例如UV/PDA檢測(cè)），這些雜質(zhì)可降低實(shí)際純化過程的效率。多數(shù)情況下，進(jìn)行一步預(yù)凈化是必要的，但因存在資金和工作量限制卻是不實(shí)際的。這需要一種能將對(duì)映體與其它雜質(zhì)鑒別開來的多功能檢測(cè)方案。除了UV/PDA檢測(cè)器之外，3100型質(zhì)譜檢測(cè)器是一種可廣泛用于手性分離的理想選擇。

　　在本應(yīng)用文獻(xiàn)中，展示了質(zhì)譜引導(dǎo)的Prep 100 SFC系統(tǒng)及其在開放床式平臺(tái)上進(jìn)行疊加進(jìn)樣和收集的功能，并被證實(shí)是一種手性化合物純化的有效工具。下文回顧并描述了用于手性分離案例的系統(tǒng)配置和方法。

　　試驗(yàn)

　　化學(xué)品

　　CO2由Airgas（Salem，NH，USA）公司提供，并以加壓液體的形式在大約1100–1300 psi的條件下，通過內(nèi)置管道供應(yīng)給質(zhì)譜引導(dǎo)的Prep 100 SFC系統(tǒng)。甲醇和反式芪氧化物（T SO，MW：196）由Sigma-Aldrich（St.Louis,MO,USA）提供。

　　SFC色譜柱

　　ChiralPak AD-H和ChiralCel OD-H（均為21 mm x 250 mm、5μm）由Chiral Technologies公司（West Chester，PA，USA）提供。

　　SFC系統(tǒng)

　　質(zhì)譜引導(dǎo)的Prep 100 SFC系統(tǒng)配備一個(gè)附加的疊加進(jìn)樣器。

　　2767型樣品管理器配置為一個(gè)簡(jiǎn)化型重復(fù)餾分收集器。

　　方法條件

　　SFC梯度和流速程序

　　對(duì)于所述的全部數(shù)據(jù)而言，100 g/分鐘的最大總流速與各種等度的改性劑程序配合使用。

　　質(zhì)譜檢測(cè)器的條件

　　用于各種試驗(yàn)的3100型質(zhì)譜檢測(cè)器標(biāo)準(zhǔn)ESI模式使用以下關(guān)鍵參數(shù)：

　　毛細(xì)管電壓：3.5 KV

　　錐孔電壓：40.0 V

　　二級(jí)錐孔電壓：3.0 V

　　射頻透鏡電壓：0.1 V

　　源溫度：150?C

　　脫溶劑氣溫度：350?C

　　脫溶劑氣體流速：400 L/小時(shí)

　　錐孔氣體流速：60 L/小時(shí)

　　0.1%的甲酸-甲醇溶液用作補(bǔ)償液流進(jìn)入質(zhì)譜，以提高電離效率。

　　數(shù)據(jù)管理

　　MassLynx/FractionLynx，第4.1版

　　結(jié)果和討論

　　疊加進(jìn)樣模式下的純化放大

　　手性分離中通用的最佳做法是利用疊加進(jìn)樣模式進(jìn)行樣品進(jìn)樣和餾分收集，這可實(shí)現(xiàn)效率最大化并降低生產(chǎn)成本。

　　在含有一定雜質(zhì)的復(fù)雜體系中，質(zhì)譜引導(dǎo)的系統(tǒng)可以鑒定和選擇性的收集感興趣的目標(biāo)化合物，并正確的忽略不需要雜質(zhì)。因而，該系統(tǒng)對(duì)于手性化合物的SFC純化，具有高效、適用范圍廣的特點(diǎn)，并成為手性藥物開發(fā)的常規(guī)主流工具。

　　我們對(duì)質(zhì)譜引導(dǎo)的Prep100 SFC系統(tǒng)進(jìn)行了一定的改造，以便將該系統(tǒng)用于手性化合物分離純化時(shí)達(dá)到其最大效益，其中包括添加了一個(gè)專用進(jìn)樣器并改變了收集床布局以容納更大的容器，從而可重復(fù)收集對(duì)映體的餾分。